Gruppo di enzimi che degradano il DNA idrolizzando il suo legame fosfodiesterico e liberando oligonucleotidi e mononucleotidi. Le loro dimensioni variano da una singola catena polipeptidica a basso peso molecolare (circa 15.000) a forme polimeriche più complesse con pesi molecolari superiori a 500.000. Intervengono nella replicazione e nella riparazione del DNA; si distinguono in esonucleasi, che idrolizzano il DNA a partire dalle estremità, ed endonucleasi che lo tagliano in corrispondenza di sequenze nucleotidiche specifiche.