fluorimetria
In chimica e in biochimica, tecnica spettrofotometrica di analisi basata sull’irradiamento di un campione con radiazione di piccola lunghezza d’onda (ultravioletto) e sulla misura qualitativa e quantitativa della radiazione emessa dal campione nell’atto di cedere l’energia prima assorbita. Se l’emissione, che consiste di radiazioni di minore o uguale energia (cioè di maggiore o uguale lunghezza d’onda), avviene in un periodo di tempo dell’ordine del miliardesimo di secondo dall’assorbimento dell’energia irradiante, il fenomeno prende il nome di fluorescenza. Si parla invece di fosforescenza se questo tempo è circa mille volte più lungo (milionesimi di secondo).
Uno strumento per analisi fluorimetrica ( fluorimetro) consta essenzialmente (v. fig.) di una sorgente irradiante (lampada a vapori di mercurio o a xeno), di una cella contenente la soluzione campione (che deve essere molto diluita) e di un rivelatore (generalmente costituito da un sistema di fotocellule) per misurare l’intensità della luce di fluorescenza o di fosforescenza. L’osservazione avviene in direzione perpendicolare ai raggi incidenti. Per ottenere risultati esatti è opportuno eseguire misure di confronto del segnale di fluorescenza della soluzione in esame e di soluzioni standard. L’equazione base dell’analisi fluorimetrica è la seguente:
dove It e I0 rappresentano le intensità rispettivamente della radiazione fluorescente e di quella incidente, B è la percentuale di radiazione incidente che viene assorbita, k il coefficiente di estinzione, c la concentrazione, t lo spessore della cella di misura. L’efficienza, o rendimento, di fluorescenza è il rapporto fra i quanti di fluorescenza emessi e i quanti assorbiti; la presenza di fenomeni secondari di perdita energetica da parte delle molecole irradiate è la causa principale dell’abbattimento della fluorescenza e di valori del rendimento marcatamente inferiori a uno.
Fluorometro Apparecchio per la misurazione del ritardo di fluorescenza; è, sostanzialmente, un fosforoscopio ad alta risoluzione temporale.